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Sonic hedgehog信号通路参与脂多糖诱导肺微血管内皮细胞表达RACK1
The SHH signaling pathways involved in the expression of RACK1 in the rat pulmonary microvascular endothelial cells induced by lipopolysaccharide
作者:王巾枚,尤青海,牛成成,贾丹,蒋丽娟    发布日期:2018-07-02    

目的 探讨脂多糖(lipopolysaccharide, LPS)是否影响大鼠肺微血管内皮细胞(rat
puhnonary microvascular endothelial cells, RPMVEC)表达活化的蛋白激酶C 受体1(protein kinase
C receptor 1, RACK1)及Sonic hedgehog(SHH)信号通路对其表达的影响。方法 取健康雄性、
体质量100~120 g、SPF 级SD 大鼠,于安徽医科大学第一附属医院呼吸内科实验室,体外培养
RPMVEC,免疫细胞化学法检测RACK1 蛋白在RPMVEC 表达,随机分为:LPS 和SAG 干预实验:(1)
LPS 量效组,0.1、1、10 mg/L LPS 与RPMVEC 孵育8 h; LPS 时效组,10 mg/L LPS 与RPMVEC
孵育0、2、4、8、12、24 h。(2)SAG 量效组,0.1、1、10 μmol/L RPMVEC 孵育8 h; SAG 时效组,
1 μmol/L SAG 与RPMVEC 孵育0、2、4、8、12、24 h。(3) LPS+SAG 干预组,10 mg/L LPS 预孵
育1 h 后加入1 μmol/L SAG 继续孵育8 h; 设空白组、LPS 组和SAG 组为对照。所有干预结束后
Western blot 法检测RACK1 蛋白表达及RT-PCR 法检测GLI-1 mRNA 表达,多组变量间比较采用
单因素方差分析,组间两两比较采用t 检验,以P<0.05 为差异有统计学意义。结果 免疫细胞化
学染色法显示RPMVEC 表达RACK1。(1) LPS 量效组(0、0.1、1、10 mg/L):RACK1 蛋白表达
量随LPS 浓度增加而升高,组间比较:P<0.05;GLI-1 mRNA 表达量为(1.109±0.063)、(1.039±0.135)、
(0.813±0.066)、(0.770±0.105 ),1 mg/L 组与10 mg/L 组比较P>0.05, 其余组间比较P<0.05 ;
LPS 时效组:LPS 作用RPMVEC 诱导RACK1 蛋白自2 h 表达上调(0.370±0.010),12 h 达最高
(1.296±0.048),组间比较差异有统计学意义(F=1 272.204,P<0.05) ;而GLI-1 mRNA 表达自2 h
开始下调(0.929±0.007),组间比较差异有统计学意义(F=306.609,P<0.05)。(2)SAG 量效组(0、
0.1、1、10 μmol/L):RACK1 蛋白表达量未见明显变化,组间比较P>0.05,GLI-1 mRNA 表达量
为(1.109±0.063)、(1.169±0.052)、(3.468±0.128)、(3.434±0.054),0 μmol/L 组与0.1 μmol/L 组
比较,1 μmol/L 组与10 μmol/L 组比较 P>0.05,其余组间比较P<0.05。SAG 时效组:SAG 作
用RPMVEC 诱导RACK1 蛋白表达与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05) ;GLI-1 mRNA 表达
自2 h 上调(3.027 ± 0.065),组间比较差异有统计学意义(F=132.841,P<0.05)。(3) LPS+SAG 干
预组:LPS+SAG 作用RPMVEC 表达RACK1 蛋白量较LPS 组下调(0.831±0.040 vs. 1.189±0.149,
P<0.05),GLI-1 mRNA 较LPS 组上调(2.720±0.129 vs. 0.796±0.082, P<0.05)。结论 RACK1 表
达增加参与LPS 刺激RPMVEC 过程,激活的SHH 信号通路可下调LPS 诱导RACK1 表达。

王巾枚,尤青海,牛成成,贾丹,蒋丽娟. Sonic hedgehog信号通路参与脂多糖诱导肺微血管内皮细胞表达RACK1[J]. 中华急诊医学杂志, 2018,27(7): 757-763.
DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2018.07.010