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核转录因子-κB参与光气吸入性肺损伤NLRP3炎性小体的表达
The Effect of NF-κB on NLRP3 of Lung Tissue in Rats with Acute Lung Injury Induced by Phosgene
作者:何岱昆,邵义如,周芳庆,张琳,申捷    发布日期:2018-06-05    

目的 通过四氢化吡咯二硫代氨基甲酸脂(PDTC)阻断核转录因子-κB(NF-κB)信号传导通路,探讨NF-κB信号通路对光气吸入性急性肺损伤(ALI)大鼠NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NLRP3)的表达和细胞焦亡的影响。方法 采用大鼠光气吸入性肺损伤动物模型。将30只大鼠随机分为三组,空气对照组(吸入与光气染毒组同等流量的空气)10只,光气染毒组(吸入8.33mg/L纯度为100%的光气5min)10只,PDTC干预组(吸入8.33mg/L纯度为100%的光气5min,腹腔注射NF-κB抑制剂PDTC 100 mg/kg)10只。染毒6h后收集血清,支气管肺泡灌洗液(BALF)和肺组织。测定中性粒细胞细胞数、蛋白含量和肺湿/干重比(W/D)。制作肺脏石蜡切片,HE染色观察形态学改变,免疫组化检测肺组织中NLRP3蛋白表达水平。RT-PCR方法对肺脏组织中NF-κB p65、NLRP3、凋亡相关斑点样蛋白(ASC)和天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶 1(caspase-1)mRNA的水平进行半定量研究。蛋白质免疫印迹试验(Western blot)技术检测肺脏组织中NF-κB p65、NLRP3、ASC和caspase-1的蛋白含量。采用双抗体夹心酶标免疫分析法(ELISA法)测定各组血清和BALF中IL-1β、IL-18 和IL-33水平。采用原位末端转移酶标记技术(TUNEL)法检测肺脏组织的细胞焦亡情况。结果 成功复制光气吸入性肺损伤模型。染毒6h后HE染色形态学观察发现:光气染毒组肺组织中有大量炎性细胞浸润,免疫组化染色结果显示:光气染毒组大鼠肺泡间隔增厚,肺组织中可见较多NLRP3阳性细胞。与空气对照组相比,光气染毒组肺脏组织中NF-κB p65、NLRP3和caspase-1 mRNA和蛋白表达量明显升高(P<0.05);与光气染毒组比较,PDTC干预组NF-κB p65、NLRP3和caspase-1 mRNA和蛋白表达量明显降低,差异有统计学意义(P<0.05)。与空气对照组相比,光气染毒组血清和BALF中IL-1β、IL-18和IL-33蛋白含量明显升高(P<0.05);与光气染毒组比较,PDTC干预组血清和BALF中IL-1β、IL-18和IL-33蛋白含量明显下降,差异有统计学意义(P<0.05, P<0.01)。TUNEL提示光气染毒组肺脏组织细胞焦亡明显增多,经PDTC干预后肺脏组织细胞焦亡明显降低。结论 NF-κB信号通路促进大鼠光气吸入性ALI中 NLRP3炎性小体的表达和细胞焦亡的发生,通过阻断NF-κB信号通路可减轻肺脏细胞焦亡进而减轻急性肺损伤。

何岱昆,邵义如,周芳庆,张琳,申捷. 核转录因子-κB参与光气吸入性肺损伤NLRP3炎性小体的表达[J]. 中华急诊医学杂志, 2018,27(6): 624-630.
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