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目的:评价法舒地尔(Fasudil,FAS)对脓毒症小鼠急性肺损伤的影响,探讨其潜在机制,为临床防治急性呼吸窘迫综合征(ARDS)提供参考。方法:采用随机数字表法将45只雄性健康成年(4-6周龄)C57BL小鼠随机分为3组:对照组(Control组,n=15)、脂多糖组(Lipopolysaccharide,LPS组,n=15)、法舒地尔干预组(FAS+LPS组,n=15)。LPS溶液(1mg/kg)腹腔注射,16h后再次LPS(5mg/kg)气道内滴注建立脓毒症小鼠ARDS模型。对照组小鼠予生理盐水腹腔注射及气道滴注;脂多糖组予LPS溶液(1mg/kg)腹腔注射,16h后气道内再次滴注LPS(5mg/kg);法舒地尔干预组分别于腹腔注射LPS前30min和气道滴注LPS后1h,小鼠腹腔内注射盐酸法舒地尔溶液(10mg/kg)。三组均于造模完成4小时后,处死小鼠取肺组织。肺部组织苏木素-伊红(hematoxylin and eosin,HE)染色,观察病理形态学变化;测定三组肺组织湿重/干重比(W/D);TBA比色法测定丙二醛(Malondialdehyde,MDA)含量及髓过氧化物酶(Myeloperoxidase,MPO)活性;免疫组化法(Immunohistochemistry,IHC)测定caspase-3表达水平;Western-Blot 法检测肺组织中RhoA、ROCK1、eNOS及p-eNOS的蛋白表达水平。结果:HE染色示与Control组比LPS组的肺组织中大量炎性细胞浸润、透明膜形成,且肺泡结构破坏严重; FAS+LPS组肺组织中炎性细胞浸润和红细胞渗出显著减少,间质水肿及肺泡结构破坏显著减轻。LPS组的肺组织W/D值、MDA含量及MPO活性较Control组显著升高(P<0.01);与LPS组相比,FAS+LPS组的W/D值、MDA含量及MPO活性均显著降低(P<0.01)。LPS组肺组织中Caspase-3的表达显著上调(P<0.01);与LPS组相比,FAS+LPS组的Caspase-3表达明显下降(P<0.01)。与Control组比,LPS组的RhoA、ROCK1的蛋白表达水平增高,p-eNOS的蛋白表达水平下降(P<0.05);与LPS组比,FAS+LPS组的RhoA和ROCK1的蛋白表达下调,但p-eNOS的蛋白表达上调(P<0.05);三组的eNOS总蛋白表达水平无统计学差异(P>0.05)。结论:法舒地尔可减轻脓毒症小鼠肺组织炎性细胞浸润程度,下调肺组织细胞凋亡,可能通过抑制了RhoA/ROCK1信号通路活性,促进eNOS的磷酸化表达有关。
姜晓东,王馨悦,宫丹丹,于健. 法舒地尔调控RhoA/ROCK1通路改善脓毒症小鼠肺损伤[J]. 中华急诊医学杂志, 2022,31(2): 179-184.