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危重病多发性神经病患者诱导性多能干细胞系的建立及向神经细胞的诱导分化
Generation of induced pluripotent stem cells and neural cells from a patient with Critical Illness Polyneuropathy
作者:詹以安,傅欢,谢安    发布日期:2018-02-02    

目的 利用危重病多发性神经病(CIP)患者皮肤成纤维细胞重编程为诱导性多能干细胞(induced pluripotent stem cells,iPS)系,并诱导其分化为神经细胞,为研究CIP神经细胞损害机制及药物筛选提供细胞模型基础。方法 选取临床诊断明确的CIP患者,收集病人皮肤组织,分离出皮肤成纤维细胞,对所得细胞进行原代培养,采用Millipore慢病毒转染试剂盒,将含有Oct4, Klf4, Sox2, c-Myc四个基因组合的慢病毒载体转染CIP患者皮肤成纤维细胞,诱导出患者来源的iPS。并采用碱性磷酸酶染色、核型分析、免疫荧光染色、实时定量逆转录PCR、畸胎瘤成瘤等实验对诱导的iPS进行全能性鉴定,通过抑制SMAD信号通路诱导iPS分化为神经细胞。结果 培养的iPS镜下观察表现为人胚胎干细胞样克隆形态生长,碱性磷酸酶染色阳性,且iPS高表达人胚胎干细胞标志性基因及蛋白,移植到免疫缺陷型小鼠模型体内能够形成畸胎瘤,并具有向三胚层分化的特点,验证本实验建立的iPS具有全能性,并可成功诱导分化为胆碱能神经元。结论 成功建立了CIP患者iPS细胞系,该iPS细胞系可成功分化为胆碱能神经元,可为危重病多发性神经病的发病机制研究和临床治疗探索提供良好的细胞模型。

詹以安,傅欢,谢安. 危重病多发性神经病患者诱导性多能干细胞系的建立及向神经细胞的诱导分化[J]. 中华急诊医学杂志, 2018,27(2): 177-182.
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