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Effects of MRP4 gene on lipopolysaccharide-induced endothelial permeability and the cytoskeleton of endothelial cells
作者：夏文芳,郑颜磊,周青山,苏镔,张桓铭 发布日期：2017-08-31
目的探讨多药耐药相关蛋白4（MRP4）对脂多糖(LPS)诱导的大鼠肺微血管内皮细胞（PMVECs）通透性及细胞骨架的影响。方法PMVECs细胞株培养3至6代后随机分为4组，对照组（细胞不做任何处理）、LPS组（细胞仅接受LPS刺激）、shMRP4重组腺病毒组(Ad-shMRP4，将针对大鼠MRP4基因设计的短发夹RNA构建腺病毒载体上，通过腺病毒感染细胞+LPS刺激)、shRNA重组腺病毒组(Ad-shRNA，带绿色荧光蛋白基因空白的重组腺病毒载体感染细胞+LPS刺激)。通过荧光显微镜观察细胞感染率，Western botting 检测MRP4的表达水平，Transwell小室法检测单层细胞通透性，激光共聚焦显微镜观察细胞内纤维肌动蛋白(F-actin)形态及分布情况。多组间差异采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。结果与对照组比较，LPS组及Ad-shRNA组MRP4的表达水平显著上调（P＜0.05）、单层细胞通透性显著增加(2、6、12、24 h分别为：0.28±0.02和0.41±0.04、0.32±0.02；0.30±0.01和0.53±0.04、0.39±0.03；0.33±0.04和1.12±0.17、0.70±0.07；0.32±0.03和0.79±0.02、0.57±0.05，P＜0.05)，F-actin分布紊乱、重构以及应力纤维形成。与LPS组比较，Ad-shMRP4组MRP4的表达水平明显下调（P＜0.05）、单层细胞通透性明显降低(2、6、12、24 h分别为：0.41±0.04 和0.32±0.02；0.53±0.04和0.39±0.03；1.12±0.17和0.70±0.07；0.79±0.02和0.57±0.05，P＜0.05)，F-actin重构以及应力纤维形成显著减少。结论MRP4基因沉默显著增减轻LPS诱导的内皮细胞通透性增高及细胞骨架破坏，对内皮细胞屏障发挥保护作用。
夏文芳,郑颜磊,周青山,苏镔,张桓铭. 多药耐药相关蛋白4对脂多糖诱导的内皮细胞通透性及细胞骨架的影响[J]. 中华急诊医学杂志, 2017,26(9): 1032-1036.DOI号:10.3760/cma.j.issn.1671-0282.2017.09.011
基金项目：国家自然科学基金（81301620，81671941）
关键词： 脓毒症 多药耐药相关蛋白4 内皮通透性 细胞骨架 基因沉默
