2 中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所,北京 100050;
3 北京林业大学生态与自然保护学院 100083
2 National Institute of Occupational Health and Poison Control, Chinese Center for Disease Control and Prevention, Beijing 100050, China;
3 College of Ecology and Nature Conservation, Beijing Forestry University, Beijing 100083, China
我国毒蘑菇种类资源丰富,到目前为止我国共报道毒蘑菇约480种[1-2]。根据各种毒蘑菇造成伤害的靶器官不同,目前我国毒蘑菇中毒类型主要分为7类,包含:急性肝损害型(acute liver failure)、急性肾衰竭型(acute renal failure)、横纹肌溶解型(rhabdomyolysis)、胃肠炎型(gastroenteritis)、神经精神型(psychoneurological disorder)、溶血型(hemolysis)和光敏性皮炎型(photosensitive dermatitis)。还有一些种类目前不能进行准确的中毒分型[1-2]。每年全国各地都有不同程度的毒蘑菇中毒事件的发生,但在中毒事件的流行病学调查和医疗救治时,往往没有进行毒蘑菇样品的采集和鉴定,据周静等[3]对我国2010-2014年调查的毒蘑菇中毒事件分析表明,没有开展物种鉴定的事件占比高达92.59%。而不同毒蘑菇可以造成不同类型的损害,因此开展准确的物种鉴定对于中毒类型的确认、中毒患者及时有效的救治显得尤为重要。
2018年11月下旬,福建省南平市先后发生2起共计10人误食“野生侧耳”的中毒事件,导致患者出现恶心、呕吐、腹痛等胃肠道症状,经过积极的对症治疗,患者均在1~3 d内康复出院。中毒事件发生后,南平市疾控中心迅速开展现场流行病学调查,前往患者采集野生蘑菇现场进行采样,并送中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所进行形态学和分子生物学鉴定,造成这两起中毒事件的毒蘑菇鉴定为日本类脐菇[Omphalotus guepiniformis(Berk.)Neda]。本研究针对这两起事件中日本类脐菇的形态鉴别要点、中毒特征及其救治等方面进行系统总结分析,从而为预防该种蘑菇中毒提供科学依据,为中毒事件处置及患者及时有效的救治提供技术支持和参考。
1 资料与方法 1.1 一般资料2018年11月24日,南平市建阳区徐市镇某村8人误食“野生侧耳”中毒,全部为男性,26日同镇邻村又有2人误食相同毒蘑菇中毒,为夫妻关系,10位患者年龄48~61岁,平均年龄52.3岁,均为外来伐竹工人。
1.2 流行病学调查通过对两起10例患者2 d内餐次调查,确定毒物暴露时间,采集未食用剩余蘑菇,并对采集地现场进行调查;对患者问询了解毒蘑菇食用量、发病时间及临床表现,应用重点个体调查、描述流行病学方法对事件进行描述。使用SPSS 19.0软件对上述调查结果进行统计分析,然后使用r检验,以P < 0.05为差异有统计学意义。本研究遵循中国疾病预防控制中心职业卫生与中毒控制所伦理审查委员会审批的伦理审查(编号:NIOHP 201904)。
1.3 毒蘑菇物种鉴定 1.3.1 形态学鉴定收集患者采集尚未加工的剩余疑似毒蘑菇,对采集地开展现场进行调查,并采集毒蘑菇,分别拍照、编号,记录寄主、采集日期、地点和海拔等信息。形态学鉴定主要包括子实体颜色、大小、形状、质地等宏观特征以及担孢子、担子、囊状体和菌丝等微观结构。显微结构观察使用相差显微镜(型号:Nikon Eclipse Ni, 尼康,日本),在1 000倍的油镜下进行观察测量。
1.3.2 分子生物学鉴定使用Phire Plant Direct PCR Kit试剂盒(Finnzymes Oy, 芬兰)对蘑菇干标本进行DNA提取和PCR产物扩增。试验方法参考笔者前期研究[4]的方法。取0.05 g蘑菇干燥标本使用手术刀切碎后置于1.5 mL离心管中,加入50 μL稀释缓冲液裂解,室温孵育5 min,所得上清液用作为后续试验的扩增模板。采用引物转录间隔区(internal transcribed spacer, ITS)ITS5(GGA AGT AAA AGT CGT AAC AAG G)和ITS4(TCC TCC GCT TAT TGA TAT GC)[5]对该标本的ITS序列进行扩增。30 μL反应体系中添加1 μL上清液作为模板。扩增反应程序为:98℃预变性5 min;98℃变性5 s,58℃复性5 s,72℃延伸5 s,35个循环后72℃延伸10 min,4℃保温。反应结束后,取3 μL PCR产物经1%琼脂糖凝胶电泳检测15 min,将电泳条带单一、明亮、片段大小约650 bp的样品送交上海生工生物工程股份有限公司测序。将测得的ITS序列与网上下载的序列用Clustalx1.83进行比对,再用BioEdit 7.0.5.3进行手工校对[6-7]。系统发育树的构建采用最大简约法,使用PAUP* 4.0b10软件[8]。
2 结果 2.1 现场流行病学调查 2.1.1 现场调查第1起中毒事件发生于2018年11月24日,共有9名外来伐竹工人共同进食晚餐,其中8人食用了自采的野生蘑菇,食用量约20~130 g不等。餐后出现恶心、呕吐、头晕、腹泻等症状,潜伏期为30~90 min,未食用野生蘑菇者未发病。第2起中毒事件发生于2018年11月26日,2名外来伐竹工人晚餐食用了自采的野生蘑菇,每人食用约500 g,随后出现恶心、呕吐、腹痛、腹泻等症状,潜伏期约为10 min。对10名患者2日内各餐回顾调查表明两事件均为野生蘑菇中毒。
2.1.2 临床表现及治疗临床表现:10例患者均出现恶心、呕吐症状,第1起中毒事件8人恶心、呕吐持续3.5~6 h,其中2人伴有1~2次腹泻,1人伴有头痛、头晕;第2起中毒事件2人因食用量大,恶心、呕吐持续约16 h,均伴有阵发性腹绞痛,其中1人出现2次腹泻;患者均无咳嗽、无胸闷、气促,无畏冷、发热。对患者的毒蘑菇食用量、潜伏期和恶心呕吐持续时间进行分析,发现毒蘑菇食用量越大,潜伏期越短,恶心、呕吐持续时间越长(表 1)。
例数 | 蘑菇食用量(g) | 潜伏期(min) | 恶心、呕吐持续时间(h) |
2 | 500 | 10 | 16 |
4 | 130 | 30 | 6 |
1 | 70 | 30 | 6 |
1 | 70 | 60 | 4.5 |
1 | 70 | 90 | 4.5 |
1 | 20 | 90 | 3.5 |
入院查体:10例患者入院时体温、脉搏、呼吸均正常,神志清楚,口唇无发绀,咽无充血,心率正常、律齐,心音正常。入院后及时给予洗胃、导泻、抑酸护胃、补液等对症支持治疗,1~3 d治愈出院。
生化检测:10例患者入院生化检测,肝功能、肾功能及心肌相关生化指标未见明显改变(表 2)。
生化指标 | 临床参考区间 | 生化检测结果 (均数±标准差) |
检出异常值人数 |
谷丙转氨酶(U/L) | 9~50 | 26.40±10.28 | 1 |
谷草转氨酶(U/L) | 15~40 | 29.40±6.72 | 1 |
谷酰转肽酶(U/L) | 10~60 | 29.40±11.19 | 0 |
碱性磷酸酶(U/L) | 45~125 | 98.70±30.02 | 3 |
总蛋白(g/L) | 65~85 | 70.62±4.36 | 1 |
白蛋白(g/L) | 40~55 | 43.43±2.17 | 0 |
球蛋白(g/L) | 20~40 | 27.19±3.54 | 0 |
白蛋白/球蛋白 | 1.2~2.4 | 1.62±0.21 | 0 |
尿素(mmol/L) | 3.1~8.0 | 7.24±2.36 | 3 |
尿酸(μmol/L) | 170~420 | 389.54±105.05 | 4 |
磷酸肌酸激酶(U/L) | 50~310 | 243.01±99.49 | 1 |
乳酸脱氢酶(U/L) | 120~250 | 160.76±20.63 | 0 |
肌酸激酶同工酶(U/L) | < 25 | 17.43±6.04 | 1 |
血淀粉酶(U/L) | < 121 | 95.38±38.56 | 3 |
采集的毒蘑菇生长在海拨950~1 010 m的阔叶林与竹林混交的山地中,簇生于水青冈(山毛榉,Fagus longipetiolata)的枯死树干和倒伏腐木上。
2.2.2 形态学鉴定结果两起中毒事件食用的剩余蘑菇和现场采集的样品形态,子实体大型,菌盖宽10~16 cm,平展,扇形、肾形至半圆形,表面光滑,呈现蓝紫色至深蓝色,成熟个体中央表面偶有皱褶,有少许白色点状鳞片散生与近基部。菌褶直生,外观淡黄白色至淡黄色,菌褶厚0.6~2.7 cm。菌柄侧生,长2~3.5 cm,直径2~3 cm,纵切后菌柄基部变为蓝色(图 1A、B)。担孢子近球形,无色至黄色,幼时薄壁、光滑、色浅,成熟后多厚壁且表面褶皱,直径约12~15 µm(图 1C)。担子棒状,多具有4个小梗,偶见2个小梗,(50~70)×(12~15)µm(图 1D)。根据宏观和微观特征,参考相关文献[9],这两起事件的蘑菇样品鉴定为日本类脐菇(Omphalotus guepiniformis)。
2.2.3 分子生物学鉴定结果图 2为基于ITS序列构建的类脐菇属的系统发育树拓扑结构图。共包含39个单元,687个特征位点,其中440个恒定特征,185个简约信息特征。简约法共得到28个MP树,系统发育树的TL为445,CI为0.721,RI为0.861,RC为0.621,HI为0.279。此外,系统发育结果表明,两次事件的3份标本与日本类脐菇(Omphalotus guepiniformis= O.japonicus)聚类到同一分枝,获得极高支持率(图 2, MP =99%)。因此,这两起事件的标本鉴定该标本为日本类脐菇。
2.2.4 毒蘑菇样品鉴定结果结合形态学、系统发育分析和生态习性,本次报道中的两起中毒事件中的3份毒蘑菇样品鉴定为日本类脐菇(Omphalotus guepiniformis)。
3 讨论通过流行病学调查、临床特征分析和实验室鉴定检测分析,基本明确本次报道的两起毒蘑菇中毒事件为日本类脐菇导致。
日本类脐菇在世界范围内还分布于日本、韩国和俄罗斯。别名月夜菌、日本发光侧耳等,主要由于该种菌褶在夜晚会发出银白色的生物荧光[10]。该种在日本9-10月份生长在死山毛榉上,是日本山区腐烂山毛榉木上的最常见的蘑菇之一[10]。近年来,在我国东北地区也发现有该种分布,主要生于山毛榉或栎树枯树干上[2]。该种近几年来同样发现于我国西南地区的云南、贵州和华中地区的湖南等省份,生于阔叶树上。本次报道的两起中毒事件采集的标本生长于11月下旬,同样生长在水青冈(山毛榉)的枯死树杆和倒伏腐木上。目前我国共报道类脐菇属(Omphalotus)真菌4种,分别为鞭囊类脐菇(O. flagelliformis Zhu L. Yang & B. Feng)、日本类脐菇(O. guepiniformis)、莽山类脐菇[O. mangensis (Jian Z. Li & X.W. Hu) Kirchm. & O.K. Mill.]和发光类脐菇[Omphalotus olearius (DC.) Singer],其中鞭囊类脐菇为2013年发现于我国云南省的新种[9, 11]。2016年,张烁等[11]首次报道了发光类脐菇在我国云南省引起的一起中毒事件,患者主要表现为消化道系统症状,与本次日本类脐菇中毒症状类似。在日本,由于该种外观常与食用菌混淆,1996—2005年,误食日本类脐菇导致的蘑菇中毒病例占到日本国内毒蘑菇中毒的31.6%,超过所有其他蘑菇中毒,成为日本最常见的毒蘑种类[12-13]。
日本类脐菇的主要毒性成份是倍半萜烯化合物illudins S和illudins M[14-17],具有高细胞毒性和基因毒性,一般在食用后30~60 min出现恶心、呕吐、腹泻和腹痛等消化器官中毒症状[18],而本次调查的两起事件,临床症状主要以恶心、呕吐为主,即使仅食用少量(约20 g)也能造成多次呕吐。食用大量该种蘑菇(500 g)的主要症状也仅表现为恶心、呕吐等胃肠道症状,并有腹部阵发性绞痛。该种的中毒表现除胃肠炎症状外,未见明显其他器官损害。本研究结果表明,食用量越大,潜伏期越短,大量食用潜伏期仅10 min,明显短于已有的报道[2, 19],同时食用量越大,恶心、呕吐症状持续时间越长,本次调查中严重的患者可达16 h。日本类脐菇中毒常见的治疗方法是输液疗法[19],本次调查的两起事件治疗方法主要是抑酸护胃、保肝、导泻、补液、营养支持治疗,与常见的治疗方法一致,1~3 d出院,预后良好。
南平市建阳区地处武夷山脉,辖区内山地多,森林资源丰富,非常适合野生蘑菇生长,当地农民群众均有采食野生蘑菇的习惯,而由此引起家庭聚集性的中毒事件时有发生。在现场调查时,通过询问多位当地村民,得知当地居民对于日本类脐菇不能食用知晓率高,而本次报道的两起事件均为外来务工人员误采误食所导致。外来务工人员对当地有毒蘑菇的危害认识不足,相关知识缺乏,是造成这两起中毒事件的主要原因;此外,外来伐竹工居住地相对偏远,采购食品不便,客观上增加了采食毒蘑菇的风险。综合这些信息,提示当地政府和相关部门应进一步关注对外来务工人员毒蘑菇相关知识的健康教育,预防中毒事件发生。
利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突
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